ETUDE DE LA SYNTHESE DE PENICILLINE ACYLASE PAR ESCHERICHIA COLI ATCC (21709 CIP 54.7)

Abstract

La production de la pénicilline acylase, enzyme catalysant l’hydrolyse de la penicilline G en 6-APA, a été étudiée. La mise en évidence de la production de la pénicilline acylase par une souche commerciale de Escherichia coli ATCC(21709 CIP 54.7 a été réalisé sur différents milieux en utilisant trois protocoles d’ensemencement. Parmi les quatre milieux de cultures étudiés, suivis qualitativement et quantitativement par dosage de l’activité enzymatique, le meilleur rendement en enzyme a été obtenu avec le milieu LB qui contient de l'extrait de levure (5g/l), le tryptone (10g/l), et le NaCl (10g/l). La culture est maintenue à pH7.5 et sous une température 30°C. Le temps d'incubation optimal était de 24 h sous une agitation mécanique de 220 rpm ensemencé à partir d’une suspension de E. Coli contenant du glycérol. Sous ces conditions, l’activité maximale atteinte pour l’hydrolyse de la penicilline G en 6-APA était de 1.3 UE sous les conditions standards pH8 et une température de 40 °C, et pour un temps de réaction de 40 min. La pénicilline acylase obtenue a été séparée par précipitation à l’éthanol. Le produit purifié possède une activité totale de 6.8 unité enzymatique.