Préparation et caractérisation d’agrégats (CLEAs) de la lipase de ricin

Abstract

Une lipase végétale extraite à partir des graines de ricin a été purifiée puis immobilisée en utilisant la méthode des agrégats enzymatiques réticulés (CLEAs). L’objectif est d’étudier sa stabilité thermique et chimique et ses performances catalytiques ainsi que sa réutilisabilité en la comparant avec la forme libre. L’extraction mécanique suivie d’une précipitation à l’acétone a permis d’obtenir un extrait enzymatique actif. L’optimisation des conditions d’immobilisation a identifié 60 % de sulfate d’ammonium, 50 mM/g de glutaraldéhyde et un temps de réticulation de 2 heures comme paramètres optimaux pour la formation des CLEAs. Les résultats démontrent que la lipase immobilisée sous forme de CLEAs présente une stabilité thermique supérieure avec une température optimale à 50 °C, soit 10 °C de plus que la lipase libre, Par ailleurs, la forme immobilisée conserve un pH optimal identique à celui de la lipase libre (pH =4,5). Les CLEAs présentent également une résistance accrue aux inhibiteurs chimiques tels que le cuivre et aux solvants organiques tels que les alcools, ainsi qu’une activité hydrolytique améliorée. L’analyse cinétique révèle une augmentation significative de la vitesse maximale (Vmax) (de 94.97 UI/g à 167.78 UI/g) , et une diminution de la constante de Michaelis-Menten (Km) de0.028mol /L à 0,0146 mol/L après l’immobilisation, traduisant une meilleure affinité pour le substrat. Les tests de réutilisabilité ont montré que les CLEAs conservent plus de 70% de leur activité initiale après 4 cycles d’hydrolyse ainsi qu’une stabilité accrue lors du stockage à 4°C.